PCR Анализатор проблемаларын чишү: еш бирелә торган сораулар һәм чишелешләр

Полимераз чылбыр реакциясе (PCR) анализаторлары молекуляр биологиядә мөһим кораллар, тикшерүчеләргә генетик тикшеренүләрдән алып клиник диагностикага кадәр булган кушымталар өчен ДНКны көчәйтергә мөмкинлек бирә. Ләкин, теләсә нинди катлаулы җайланма кебек, PCR анализаторы аның эшенә тәэсир итә торган проблемалар белән очрашырга мөмкин. Бу мәкалә кайбер уртак сорауларга мөрәҗәгать итәPCR анализаторыпроблемаларны чишү һәм гомуми проблемаларга практик чишелешләр тәкъдим итә.

1. Нигә минем PCR реакциясе көчәйтелми?

Кулланучылар алдында торган иң еш очрый торган проблемаларның берсе - PCR реакциясенең максатчан ДНКны көчәйтә алмавы. Моны берничә фактор белән аңлатырга мөмкин:

Дөрес булмаган праймериз дизайны: Праймерларның максат эзлеклелеге өчен һәм оптималь эретү температурасы (Tm) булуына инаныгыз. Билгесез бәйләнештән саклану өчен, праймериз дизайны өчен программа коралларын кулланыгыз.

Шаблон ДНКсы җитми: ДНК шаблонын җитәрлек күләмдә кулланганыгызны тикшерегез. Бик аз көчсезлеккә китерәчәк яки көчәйтү юк.

Ampleрнәктә ингибиторлар: ampleрнәктәге пычраткыч матдәләр PCR реакциясен тоткарлый ала. ДНКны чистартырга яки бүтән чыгару ысулын кулланырга уйла.

Чишелеш: Праймер дизайныгызны тикшерегез, шаблон концентрациясен арттырыгыз, һәм сезнең үрнәктә ингибиторлар юклыгына инаныгыз.

2. Ни өчен минем PCR продукты дөрес булмаган зурлык?

Әгәр сезнең PCR продукт күләме көтелгәнчә булмаса, бу реакция шартлары яки кулланылган ингредиентлар белән проблеманы күрсәтергә мөмкин.

Конкрет булмаган көчәйтү: Праймер уйланмаган сайтка бәйләнгән очракта булырга мөмкин. Бласт кебек корал ярдәмендә праймерларның үзенчәлеген тикшерегез.

Дөрес булмаган аннальинг температурасы: Әгәр аннальинг температурасы бик түбән булса, конкрет булмаган бәйләнеш килеп чыгарга мөмкин. Градиент PCR белән аннальинг температурасын оптимизацияләү.

Чишелеш: PCR продуктларының төгәллеген яхшырту өчен примерның үзенчәлеген раслагыз һәм анналь температураны оптимальләштерегез.

3. Минем PCR анализаторым хата хәбәрен күрсәтә. мин нәрсә эшләргә тиеш?

PCR анализаторындагы хаталар куркыныч булырга мөмкин, ләкин алар еш кына потенциаль проблемаларны күрсәтә ала.

Калибрлау проблемалары: PCR анализаторы дөрес калибрланган булуына инаныгыз. Төгәл нәтиҗәләргә ирешү өчен регуляр хезмәт күрсәтү һәм калибрлау тикшерүләре бик мөһим.

Программа төркеме: Кайвакыт, программа хаталары проблемалар тудырырга мөмкин. Компьютерыгызны яңадан эшләтеп җибәрегез һәм программа тәэминаты яңартуларын тикшерегез.

Чишү: Конкрет хата коды өчен кулланучы кулланмасына мөрәҗәгать итегез һәм тәкъдим ителгән проблемаларны чишү адымнарын үтәгез. Даими хезмәт күрсәтү күп проблемаларны булдырмаска мөмкин.

4. Ни өчен минем PCR реакция нәтиҗәләре туры килми?

Бер-берсенә туры килмәгән PCR нәтиҗәләре берничә сәбәп аркасында күңелсезләнергә мөмкин:

Реагент сыйфаты: ферментлар, буферлар һәм dNTPларны кертеп, барлык реагентларның яңа һәм югары сыйфатлы булуына инаныгыз. Вакыт беткән яки пычратылган реагентлар үзгәрүчәнлеккә китерергә мөмкин.

Rылылык велосипедын калибрлау: Температураның туры килмәве PCR процессына йогынты ясарга мөмкин. Rылылык велосипедының калибрлануын регуляр рәвештә тикшерегез.

Чишелеш: qualityгары сыйфатлы реагентлар кулланыгыз һәм эзлекле нәтиҗәләрне тәэмин итү өчен җылылык велосипедын регуляр рәвештә калибрлагыз.

5. PCR реакция эффективлыгын ничек яхшыртырга?

PCR реакцияләренең эффективлыгын күтәрү югары уңышка һәм ышанычлырак нәтиҗәләргә китерергә мөмкин.

Реакция шартларын оптимальләштерү: Праймерларның төрле концентрацияләрен кулланып эксперимент, DNA шаблоны һәм MgCl2. Eachәр PCR реакциясе оптималь эш өчен уникаль шартлар таләп итә ала.

Highгары тугрылыклы ферментларны кулланыгыз: Әгәр төгәллек критик булса, көчәйтү вакытында хаталарны киметү өчен, югары ышанычлы ДНК полимеразасын кулланыгыз.

Чишелеш: Сезнең махсус PCR урнаштыру өчен иң яхшы шартларны табу өчен оптимизация эксперименты үткәрегез.

Йомгаклап

Проблеманы чишү аPCR анализаторыавыр эш булырга мөмкин, ләкин гомуми проблемаларны һәм аларны чишү сезнең PCR тәҗрибәгезне сизелерлек арттырырга мөмкин. Бу уртак проблемаларны чишеп, тикшерүчеләр PCR нәтиҗәләрен яхшырта һәм молекуляр биология кушымталарында ышанычлы нәтиҗәләр бирә ала. Даими хезмәт күрсәтү, реагентларны җентекләп сайлау, реакция шартларын оптимизацияләү - уңышлы PCR анализы ачкычы.