PCR реакциясендә комачаулык факторлары

PRICH RECAITY вакытында кайбер комментарь факторлары еш очрый.
ПХРның бик югары сизгерлеге аркасында, пычрану PZ нәтиҗәләренә тәэсир итүче иң мөһим факторларның берсе булып санала һәм ялган уңай нәтиҗәләр китерә ала.
Ялган тискәре нәтиҗәләргә китерә торган төрле чыганаклар. PCR катнашмасының бер яки берничә мөһим өлеше яки көчен тыя икән, комачаулый, диагностик ана комачаулый ала. Бу эффективлыкны һәм хәтта ялган тискәре нәтиҗәләргә китерергә мөмкин.
Талашуга өстәп, максатлы яман кислота сафлыгын югалту өчен җибәрү һәм / яки саклагычлар өчен үрнәк әзерләнгәнче, саклау һәм / яки саклау шартлары аркасында булырга мөмкин. Аерым алганда, югары температура яки җитәрлек күләмдә саклагыч күзәнәкләр һәм атом кислоталарының зыянына китерергә мөмкин. Күзәнәк һәм тукымалар фиксациясе һәм парафин парафин ДНК фрагментлаштыру һәм өзлексез проблема (1 һәм 2 нче саннарны кара). Бу очракларда хәтта оптималь изоляция һәм чистарту ярдәм итмәячәк.

Рәсем 1 | ДНКның имобилизацияләү эффекты
Агароз Гел Электроризны күрсәтте, ДНКның сыйфаты акцияләр парфэтрин бүлекләреннән аерылып торалар. Фиксация ысулына карап, төрле фрагмент озынлыктагы ДНК бар иде. ДНК туган туңдырылган үрнәкләрдә һәм буфер формальләштергәндә генә сакланган. Көчле кислоталы буин фельативын яки эш урынын куллану, формаль кислоталы формаль форманы югалтты, нәтиҗәдә ДНК. Калган фракция бик зәгыйфьләнгән.
Сулда фрагментлар озынлыгы килобаз парында (КБП) күрсәтелә

Рәсем 2 | Ямьсез кислота максатларының бөтенлеген югалту
а) ике-5 'ике-дә иртәнге аш Dna максатлы юлга китерәчәк. ДНК синтезисы кечкенә фрагментта булачак. Ләкин, ДНК фрагментында примерлаучы сайт юкка чыкса, сызыклы көзеш генә була. Иң уңайлы очракта фрагментлар бер-берсен кабатлый ала, ләкин уңыш аз һәм аста ачыклау дәрәҗәсе булачак.
б) нигезләрне югалту, нигездә, нигез салу һәм Темидин димабы формалашу аркасында, H-облигацияләр саны һәм ТМның кимүе кимүенә китерә. Озынрак җылыту этабында праймериз матрица Даннан ераклашачаклар һәм хәтта каты шартларда да анналь эсналь булмас.
в) янәшәге тимин базалары тт dimer тәшкил итә.
Начар диагностикада еш очрый торган тагын бер уртак проблема - фенол-хлороформ чыгару белән чагыштырганда, максатлы ямьсез кислоталарның оптималь чыгарылуы. Экстремаль очракларда бу ялган тискәре әйберләр белән бәйләнештә булырга мөмкин. Күзәнәк калдыкларының кайнап торган лизимик яки энзиматик ашату белән күп вакыт сакланырга мөмкин, ләкин бу ысул, ятак кислотасы чыгару аркасында еш түбән PCR сизгерлеге аркасында еш кына аз PR сизгерлеге нәтиҗәсе.

Амплификация вакытында полимеразлык эшчәнлеген тыю

Гомумән алганда, тыю pccr нәтиҗәләренә китерә торган барлык факторларны сурәтләү өчен контейнер концепциясе буларак кулланыла. Биохимик мәгънәдә, кызыксыну фермент эшчәнлеге белән чикләнә, ягъни, ул Dna, MG2 + TAAK ДНК полимеразасы өчен) субстрат-продуктларны кире кагуны каплый).
Abraberәяүле яки реакцияләр компонентлары ферментны турыдан-туры тыярга яки аны костюмны тыярга мөмкин (мәсәлән, эдта), шуның белән кимчелекне активлаштыра һәм кимеде, кимеде яки ялган тискәре PCR нәтиҗәләрен алып бара.
Ләкин, реакция компонентлары һәм максатлы үзара бәйләнеш арасында күп аралашу шулай ук ​​'PZr ингибиторлары »итеп билгеләнә. Күзәнәкнең бөтенлеге изоляция белән бозылганнан соң, ямьсез кислота үрнәк белән аның әйләнә-тирәдәге тирәсе һәм аның тирәсендәге этап арасында үзара бәйләнешле булырга мөмкин. Мәсәлән, 'СкаВерьерлар' бер яки икеләтә бәхәсле ДНКны бер яки икеләтә дип бәйлиләр һәм ахыр чиктә PCR реакция савытына җиткәч, изоляция һәм чистарту белән комачаулый ала.
Гомумән алганда, PCZ ингибитлары клиник диагностик тестлар өчен кулланыла), диета өстәмәләре (ремик, глиоген, гликоген, гликоген, глиоген, гликоген, глиоген, глиоген, глионнар, глиоген, глионнар) һәм компонентлар (феноллар, авыр металл)

Аңлагыз киң таралучыларны бактерияләр һәм эукариотик күзәнәкләрдә табып була, максатсыз ДНК, перчаткалар һәм пластмасса кебек тукымалар матроле җиһазлары. Чыгарылганда яки аннан соң ямьсез кислоталарны чистарту - PZ ингибиторларын бетерү өчен өстенлекле ысул.
Бүгенге көндә, төрле автоматлаштырылган чыгару җиһазлары күп куллы протоколларны алыштырырга мөмкин, ләкин 100% торгызу һәм / яки максатларны чистарту беркайчан да ирешелмәгән. Потенциаль ингибиторлар чистартылган атлик кислоталарда булырга мөмкин, яисә инде көченә кергәндер. Ингибиторларның йогынтысын киметү өчен төрле стратегияләр бар. Тиешле полимера сайлау ингибитор эшчәнлегенә зур йогынты ясарга мөмкин. PZ-ны киметү өчен башка исбатланган ысуллар полимераз концентрациясен арттыралар яки BSA кебек өстәмәләрне куллану.
PCR реакцияләрен ингайсацияләү эчке процессның сыйфатын контрольдә тоту белән күрсәтелергә мөмкин (IPC).
Этонол, Эдта, CetAB чыгару өчен барлык реакторларны чыгару өчен кайгырту алынырга тиеш, мәсәлән, ямьсез кислотадан изоляцияләнгән адым белән изоляцияләнә. Аларның концентрациясенә карап, алар PCZны активлаштырырга яки тыя алалар.